細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

A2058人黑色素瘤細(xì)胞

商品屬性

商品介紹

生長特性 貼壁細(xì)胞

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

凍存條件

凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yǎng)方案A（默認(rèn)）

生長培養(yǎng)基:

DMEM＋10% FBS＋1% P/S

培養(yǎng)條件:

氣相：空氣，95%；CO2，5%, 溫度：37℃

推薦傳代比例 1:3-1:6

推薦換液頻率 2-3次/周

參考資料(來源文獻(xiàn))

年齡（性別） 男性；43歲

組織來源 皮膚

細(xì)胞類型 腫瘤細(xì)胞

腫瘤類型 黑色素瘤細(xì)胞

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟：

（1）當(dāng)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)和生長密度達(dá)到90%時，進行傳代。

（2）吸棄培養(yǎng)液。添加PBS清洗1~2次，搖勻后棄掉。

（3）加入覆蓋瓶底量的且含有EDTA。

（4）培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱進行消化，3min左右拿出，用顯微鏡觀察細(xì)胞有無超過80%的量，發(fā)生收縮變圓、細(xì)胞間隙變大。輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，加入2倍量的中止消化，并吹打均勻，避免消化過度。

（5）細(xì)胞懸液吸至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）吸棄上清，加入培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，吹打細(xì)胞使其均勻分散。

（7）吸棄細(xì)胞懸液，選擇適合的密度接種到新培養(yǎng)瓶中，補充培養(yǎng)液并搖勻，放置37℃的CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間。

（9）細(xì)胞凍存

細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

公司正在出售的產(chǎn)品：

肌球蛋白輕鏈激酶(MYLK)重組蛋白 Recombinant Myosin Light Chain Kinase (MYLK)

EIF4EBP1 Protein Human 重組人 4E-BP1 / EIF4EBP1 蛋白

SELE重組小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 Protein

TNFRSF9 Protein Canine 重組狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 蛋白

APP重組人 Beta-amyloid 38 / Beta-APP38 蛋白 (aa 672-709, His & GST 標(biāo)簽) Protein

SELE重組小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 Protein

肌球蛋白輕鏈激酶(MYLK)重組蛋白 Recombinant Myosin Light Chain Kinase (MYLK)

APP重組人 Beta-amyloid 38 / Beta-APP38 蛋白 (aa 672-709, His & GST 標(biāo)簽) Protein

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TNFRSF9 Protein Canine 重組狗 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 蛋白

小鼠降鈣素原(PCT)ELISA 試劑盒 96T/48T

People mumps virus IgG ELISA Kit 人腮腺病毒IgG 檢測試劑盒

HumanmembraneIgD,mIgDELISAKit 人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-cytomegalovirusIgMaibody,ai-CMVIgM檢測試劑盒人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgM(ai-CMVIgM)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物基因組DNA化試劑盒(高多糖/酚)50次

Humanα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit人內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

A2058人黑色素瘤細(xì)胞小鼠催產(chǎn)素(OT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠巨噬細(xì)胞性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠Ⅰ型膠原N末端肽(X)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠5核苷酸酶(5-)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)檢測試劑盒 ，英文名： IFN-β/IFNB ELISA Kit

Mouse leinizing hormone (LH) ELISA Kit 小鼠促黃體激素(LH)檢測試劑盒

ELISA 小鼠(mouse NO)  進口分裝

CLIAKitforIL-11(HumanIerleukin11)ELISAKIT人白介素11

通用型馬皰疹病毒(EquineHerpesVirusType1)試劑盒20次

ELISAKitVEGFR-2大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2